Metodi per la misurazione NADPH - ossidasi

La NADPH ossidasi è identificato come produttore di specie reattive dell'ossigeno durante i processi , tra cui la crescita delle cellule muscolari lisce vascolari . Queste specie reattive sono collegati a una serie di malattie come ipertensione , diabete , cancro e infiammazione; metodi per monitorare l' attività di questo enzima è fondamentale l'eventuale sviluppo di trattamento . NADPH ossidasi

NADPH ossidasi appartiene ad una famiglia di enzimi che aiutano con il trasferimento di elettroni tra NADPH e ossigeno . Tuttavia , NADPH ossidasi ha la capacità unica di produrre specie reattive dell'ossigeno da questa reazione , rispetto ad altri membri della famiglia in cui le specie reattive dell'ossigeno viene generato attraverso altri mezzi . Un complesso proteico multimerico , NADPH ossidasi è costituito dal flavocytochrome b558 legata alla membrana , che viene utilizzato come marcatore di misura .
Specie reattive dell'ossigeno ( ROS ) Generation

la principale fonte di ROS , in particolare il perossido di idrogeno , NADPH ossidasi produce piccoli ma costanti quantitativi tramite la sua isoforma espressa nei vasi sanguigni , che sono coinvolti nei processi di segnalazione . Questa produzione coerente può eventualmente sopraffare il sistema antiossidante naturale , causando una perdita di composti protettivi come l'ossido nitrico , e la generazione di ancora più potente ROS .
Metodo Chemiluminescence

chemiluminescenza consente altamente sensibile , la misurazione automatizzata di attività NADPH ossidasi in un range di concentrazioni . Durante questo metodo , substrato NADPH viene aggiunto ad un campione di tessuto contenente NADPH ossidasi . Per reazione , ROS è generato e reagisce con il composto lucigenina per produrre un effetto chemilluminescent , che viene misurata . La luminescenza è direttamente proporzionale all'attività NADPH ossidasi , come l'enzima determina la velocità di reazione .
Kinetic Assay via Citometria a flusso

In questo metodo , i campioni di tessuto vengono analizzati mediante citometria a flusso . Il midollo osseo è separato dal campione utilizzando soluzione salina bilanciata di Hanks ' . Coloranti specifici e anticorpi di rilevamento vengono aggiunti al campione in provette di polistirene . Il campione viene quindi incubato , lavato con soluzione salina bilanciata Hanks ' , etichettati con sonde molecolari e preparati con citometria a flusso. Provette di controllo sono fatte anche per il confronto e per calibrare il citofluorimetro . La macchina è poi corse e le misurazioni registrate .