Come varia la quantità di digestione BAPNA nel tempo?

La digestione del BAPNA (Benzoil-DL-arginina-p-nitroanilide) da parte della tripsina segue la tipica cinetica enzimatica di Michaelis-Menten. Inizialmente la velocità di digestione aumenta con il tempo man mano che più molecole di enzimi vengono coinvolte nella reazione. Tuttavia, poiché la concentrazione del substrato diminuisce nel tempo, la velocità di digestione rallenta. La relazione tra la quantità di BAPNA digerita e il tempo può essere descritta dalla seguente equazione:

[BAPNA]t =[BAPNA]0 - k[E][BAPNA]0*t

Dove:

- [BAPNA]t:Quantità di BAPNA digerita al tempo t

- [BAPNA]0:Concentrazione iniziale di BAPNA

- k:Costante di velocità della reazione

- [E]:concentrazione di trypsin

- t:Tempo

Il grafico di [BAPNA]t rispetto a t mostra tipicamente una curva iperbolica. La fase lineare iniziale della curva rappresenta il periodo in cui la velocità di reazione è costante e proporzionale alla concentrazione dell'enzima. Man mano che la reazione procede, la curva si stabilizza a causa dell'esaurimento del substrato e della diminuzione della velocità di digestione.

Misurando la velocità iniziale (Vo) della reazione e determinando la costante di Michaelis-Menten (Km) attraverso l'analisi grafica (ad esempio, grafici Lineweaver-Burk o Hanes-Woolf), è possibile caratterizzare la cinetica dell'enzima e ottenere informazioni dettagliate sul processo catalitico efficienza e affinità del substrato della tripsina per BAPNA.