Biotinylation protocolli

Biotinilazione è il processo di collegamento biotina , o vitamina H , ad una proteina o altre molecole . Questa procedura scientifica è usato soprattutto nel campo delle biotecnologie e della ricerca di biologia molecolare che coinvolge DNA , proteine ​​e antigeni , che sono le molecole del sistema immunitario del corpo riconosce come invasori . Protocolli biotinylation includono la biotinilazione di anticorpi e peptidi , così come biotinylation superficie cellulare . Biotinilazione di anticorpi

Per creare un collegamento biotina anticorpi proteine ​​produrre quando un antigene entra nel corpo , tecnici utilizzare bicarbonato di sodio ( NaHC03 ) a pH 9; dimetilsolfossido ( DMSO );

NHS - biotina e una sostanza salina chiamato PBS . I campioni vengono mescolati con bicarbonato di sodio , che viene poi aggiunto al NHS - biotina in DMSO . La soluzione viene quindi aggiunta agli anticorpi analizzati e incubata su un apparecchio chiamato un rotatore per quattro ore a temperatura ambiente o per una notte a 39,2 gradi Fahrenheit . Infine , la soluzione viene diluita con PBS .
Cellulari di superficie Biotinilazione

Nel protocollo biotinylation superficie cellulare , tecnici utilizzare coltura tissutale , tampone fosfato salino ( PBS ) a pH 7.4 e Sulfosuccinimidil - 2 - ( biotinamido ) etil - 1 soluzione tampone ,3- dithiopropionate per bilanciare l'acidità contenenti gruppi amminici e TrisCl , secondo i protocolli attualmente in Protein cellule Science.The si mescolano con la biotina e la soluzione tampone , decantato e centrifugate . Contenuti solidi e proteine ​​specifiche sono successivamente analizzati su un piatto elettroforesi su gel .
Biotinilazione di Peptidi

Per eseguire il biotinilazione di peptidi , il reagente utilizzato è NHS SS - biotina , secondo Philip Shepherd in " Anticorpi monoclonali : a Practical Approach ". I peptidi sono brevi frammenti di amminoacidi, le molecole che formano le proteine ​​e DNA . In questo protocollo , la soluzione commerciale NHS -SS biotina è disciolto in acqua . Poi viene aggiunto il campione peptide ad esso , insieme con bicarbonato di sodio per bilanciare l'acidità o pH . La soluzione viene quindi incubata su ghiaccio per due ore . I tecnici possono osservare il campione , con o senza le molecole di biotina .