Protocolli per la Hoechst colorazione

Le macchie Hoechst sono coloranti fluorescenti utilizzate per l'etichettatura di DNA e RNA mediante microscopia a fluorescenza e citometria a flusso tecniche . Hoechst 33258 e Hoechst 33342 sono i più utilizzati di queste macchie . Essi hanno la capacità di legarsi alle molecole di DNA , causando i nuclei e mitocondri appaiano fluorescenti ai raggi ultravioletti . Protocolli per la colorazione Hoechst sono pratica comune nei laboratori biotecnologici e genetica , e comprendono tecniche di colorazione delle cellule utilizzando sia Hoechst 33258 e Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC colorazione e Stem Cell Purificazione protocollo

Questo protocollo è utilizzato per colorare le cellule di topi midollo osseo . I tecnici preparano campione di midollo osseo con soluzione HBSS + sale, tampone HEPES e siero fetale di vitello . Filano la soluzione e aggiungere un mezzo DMEM pre-riscaldato . Si aggiunge quindi macchia Hoechst . La soluzione è posta in un bagno d'acqua 98,6 gradi Fahrenheit per esattamente 90 minuti , riporta il Dipartimento di Immunologia presso l'Università di Pittsburgh . Segmenti di DNA appaiono fluorescenti sotto un citometro .
Hoechst 33342 DNA colorazione

Durante questo protocollo , i tecnici sospesi Hoechst 33342 macchia in acqua distillata , aggiungere siero di vitello fetale 2 per cento il campione cellulare , mantenendo il pH a 7,2 con l'aiuto di una soluzione tampone . Le cellule vengono poi incubate a 98,6 gradi C per un'ora , e subito analizzati con un pezzo di apparecchiatura denominata citometro .

DNA Stained è quindi visibile e fluorescenti , secondo l'Università del Michigan Health System .


Detection DNA Utilizzando il DNA-binding Fluorocromo Hoechst 33258

i protocolli utilizzati un apparecchio chiamato spettrofotometro per l'analisi del DNA e RNA segmenti. I tecnici usano Hoechst 33258 Soluzione di lavoro e timo di vitello campioni di DNA . Fanno anche una soluzione separata con il campione di DNA e di una sostanza chimica chiamata bromuro di etidio . Più tardi , si confrontano i risultati di colorazione delle cellule in entrambi i media , utilizzando uno spettrofotometro , secondo i protocolli attualmente in Citometria .