PBMC Protocollo

crioconservati cellule mononucleate del sangue periferico ( PBMC ) sono una frequente fonte di campioni per la ricerca che include immunoterapie e le risposte ai vaccini . Mentre alcuni protocolli sono limitati a isolamento e congelamento fasi del processo , altri comprendono procedure scongelamento . Procedura di isolamento e procedura di congelamento

Un composto di commercio per promuovere la separazione viene inserito in ogni provetta da centrifuga da 50 ml e le provette vengono centrifugate per 30 secondi . Caps di tubi di sangue vengono spruzzati con l'alcol prima di aprire , poi sangue intero trattato con anticoagulante viene poi trasferito tramite pipetta nelle provette da centrifuga . Lo strato di plasma del sangue viene aspirato con una pipetta .
Freezing

Le cellule derivate dalla fase precedente saranno poi centrifugati con una soluzione salina tamponata tre volte. Dopo un numero di celle , i campioni saranno centrifugati poi sospesi in mezzo congelamento . I campioni di congelamento medie sono accanto dividono tra cryovials in una quantità mL . I flaconi sono conservati durante la notte in un

-70 º C freezer e si trasferisce a conservazione a lungo termine in azoto liquido il giorno successivo .
Sicuro scongelamento

cryovials sono trasferiti da azoto liquido per un bagno d' acqua a 37 º e il campione è permesso di scongelare uno o due minuti . Un supporto trasporto caldo viene aggiunto a ogni fiala . Sospensione cellulare diluita viene centrifugata per sette minuti . Il numero e la vitalità cellulare vengono controllati , se le cellule hanno bisogno di concentrazione, i campioni vengono centrifugati altri sette minuti. Il campione viene diluito alla soluzione di lavoro e riposato per dodici a diciotto ore prima di iniziare l'esame nel protocollo specificato .