Punte coltura tissutale

coltura tissutale è la propagazione di cellule in un mezzo di coltura liquido in laboratorio per vari scopi scientifici . Ad esempio , colture di tessuti sono utilizzati nella diagnosi di malattie genetiche , come mezzo per la coltivazione patogeni intracellulari come batteri o virus o nelle indagini sulle cellule stesse . Le cellule di coltura tissutale

Alcune cellule aderiscono ai fondi di capsule di Petri o rimangono sospese nel liquido . Le cellule possono essere di origine vegetale o animale . Cellule utilizzate nelle colture tissutali possono essere cellule primarie , nel senso che sono state raccolte direttamente da un organismo, o di una linea cellulare che è stata mantenuta in coltura . Le linee cellulari sono spesso le cellule tumorali , e questo deve essere considerato al momento di pianificare o interpretariato esperimenti.
Il trattamento di cellule delicatamente

cellule aderenti sono rimossi dal loro capsula di Petri per il passaggio da raschiatura o con una proteasi , generalmente tripsina e EDTA . Raschiare uccide molte cellule e dovrebbe essere utilizzato solo quando la preparazione di lisati cellulari ( preparazioni liquide del contenuto della cella per analisi ), o quando tripsina /EDTA deve essere assolutamente evitato .

Trypsinizing non solo rimuove le proteine ​​che le cellule aderiscono al piatto ma molte altre proteine ​​sulla membrana della cellula , anche. Cellule palla e richiedere un certo tempo , di solito durante la notte , per ristabilire un legame con il piatto . L'aggiunta di una minima quantità di tripsina - intorno 1 ml per un pallone 25cm2 - dondolo il pallone per cinque secondi o meno per rivestire il monostrato e poi travaso o aspirando la tripsina in eccesso riduce la quantità di tripsina a cui il monostrato è esposto . Lasciate che le cellule riposare in incubatrice durante tripsinizzazione .

Dopo che le cellule sfilare sul fondo del piatto , aggiungere media con siero e aspirare il lisato su e giù per la pipetta delicatamente. Lasciare un po 'di media per rimanere nel piatto , come si pipetta su e giù diverse volte di spezzare grumi e ottenere una sospensione omogenea .

Non aspirare bolle nella pipetta . Inoltre, non vigorosamente mescolare o agitare la sospensione cellulare ; le cellule sono molto fragili in questo stato appallottolato .
per inattivare calore o non riscaldare Disattiva

Quando le tecniche di coltura cellulari erano nella loro infanzia , siero bovino fetale ( FBS ) era noto per contenere proteine ​​del complemento , che sono proteine ​​del sistema immunitario che le cellule lisare . Proteine ​​del complemento non sono desiderabili in coltura cellulare . FBS - inattivando calore a 56 gradi centigradi per 30 minuti renderanno proteine ​​del complemento inattivi. Preriscaldamento FBS a 37 gradi C è anche sufficiente per inattivare proteine ​​del complemento .

Nei primi giorni , il calore inattivando FBS ucciso anche micoplasma e altri contaminanti. Al momento , filtro di sterilizzazione è stata effettuata con filtri 0.45um . Oggi , filtriamo sterilizzare FBS e media attraverso 0.1um o filtri anche 0.04um . No micoplasma scivolare attraverso quel

Questo ci lascia la questione se non per scaldare inattivare inattivazione

calore degrada tutti i componenti della FBS - . . Come vitamine, aminoacidi e fattori di crescita - . forse al di sotto della soglia per alcune linee cellulari schizzinoso

Se si sta lavorando con una linea cellulare a crescita lenta o schizzinoso , considera semplicemente filtrare sterilizzare i vostri FBS . Potreste trovare questo aumenta la robustezza delle vostre cellule .