Perché hai bisogno di lavare i pozzetti dopo ogni passaggio?

Il lavaggio dei pozzetti della micropiastra dopo ogni fase di vari test biochimici e di biologia molecolare come ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), isolamento del DNA/RNA, PCR e Western Blotting è una parte essenziale del protocollo sperimentale. Lo scopo delle fasi di lavaggio è rimuovere i reagenti residui, i componenti della reazione o eventuali contaminanti che potrebbero interferire con le fasi successive o influenzare l'accuratezza e la specificità del test.

Ecco alcuni motivi per cui sono necessarie le fasi di lavaggio:

Rimozione delle sostanze non legate: Le fasi di lavaggio dopo l'aggiunta di reagenti o anticorpi aiutano a rimuovere eventuali sostanze non legate, come anticorpi in eccesso, molecole leganti non specifiche o componenti di reazione che non vengono catturati o legati alla fase solida. Ciò garantisce che il segnale di rilevamento sia specifico e privo di interferenze di fondo.

Ridurre al minimo la contaminazione incrociata: Le fasi di lavaggio riducono efficacemente il rischio di contaminazione incrociata tra i campioni. Ciò è particolarmente importante quando vengono elaborati più campioni contemporaneamente, poiché impedisce il trasporto di componenti di reazione o contaminanti da un pozzetto all'altro. Il lavaggio aiuta a mantenere l'integrità e l'accuratezza dei risultati dei singoli campioni.

Rimozione efficace delle sostanze interferenti: Il lavaggio è necessario per rimuovere sostanze che potrebbero interferire con i passaggi successivi. Ad esempio, in un test ELISA, il lavaggio aiuta ad eliminare i complessi coniugato-anticorpo non legati, riducendo così lo sviluppo del colore di fondo e migliorando la specificità della reazione colorimetrica. Nella PCR, il lavaggio rimuove nucleotidi, primer e polimerasi dai cicli di amplificazione precedenti, riducendo al minimo il rischio di contaminazione da carryover e garantendo un'amplificazione accurata nel ciclo successivo.

Standardizzazione e riproducibilità: Seguendo procedure di lavaggio standardizzate, i ricercatori garantiscono che le condizioni siano coerenti tra gli esperimenti e tra i diversi laboratori. Questa coerenza è fondamentale per ottenere risultati affidabili e riproducibili.

La procedura di lavaggio può comportare l'uso di una pipetta multicanale o di un lavapiastre automatizzato per erogare e aspirare il tampone di lavaggio. Il tampone di lavaggio è generalmente una soluzione salina tamponata che assomiglia alla composizione del tampone originale utilizzato nel test, ma non contiene alcun componente di reazione.

È fondamentale un lavaggio adeguato senza eccessivi lavaggi. Un lavaggio eccessivo può comportare la perdita di componenti essenziali legati alla fase solida e influenzare la sensibilità del test. Pertanto, i protocolli di lavaggio sono attentamente progettati per ottenere la rimozione ottimale delle sostanze indesiderate preservando l'integrità delle molecole immobilizzate o degli analiti di interesse.