Tecnica HPLC

HPLC sta per cromatografia liquida ad alta prestazione , una procedura standard di analisi qualitativa e quantitativa utilizzati nei laboratori di analisi . HPLC è affidabile e ripetibile , che rende la tecnica preferita per separare, identificare e quantificare molecole da miscele complesse di entrambi i componenti chimici e biologici . Quattro componenti

La tecnica HPLC contiene quattro componenti principali . In primo luogo, il sistema solvente consegna ( fase mobile ) , che porta i campioni attraverso la colonna , è importante , in quanto la polarità influisce sulla capacità del sistema per separare le molecole . La colonna cromatografica è di solito una colonna verticale di vetro che viene riempito con un adsorbente . In secondo luogo, l' adsorbente ( noto anche come fase stazionaria , dal momento che non si muove ) è comunemente gel di silice o allumina . Terzo, il sistema di introduzione del campione è costituito da una sorta di porta di iniezione per introdurre il campione da analizzare nel sistema di erogazione del solvente . Il quarto componente è il rivelatore .

Rilevatori

Il tipo di rivelatore utilizzato dipende dal tipo di campione tecnici sono in esecuzione e che le molecole che stanno cercando di isolare . I criteri il tecnico usa quando si sceglie un rivelatore includono selettività , rapporto segnale -rumore , limite di rivelazione , range lineare , costante di tempo , deriva e volume cellulare . Rivelatori comunemente usati includono rilevatori a raggi ultravioletti - visibile , spettrometri di massa , indici di rifrazione , rivelatori di fluorescenza o dispositivi di dispersione della luce per evaporazione.
Procedura

Accendere il rivelatore, le pompe (utilizzati per aggiungere pressione per spostare la fase mobile attraverso la fase stazionaria ) , e il computer che registra e stampare il cromatogramma . Scegli i programmi adeguati al fine di raccogliere i dati desiderati . Iniettare il campione nella porta di iniezione . Tenete d'occhio la pressione. Ogni tipo di colonna ha una pressione massima ; non superare questo o separazione non si verificherà . Stampare il cromatogramma e analizzare i risultati . Alla fine di ogni corsa , è importante per scovare la porta di iniezione per evitare l'accumulo , che può creare intasamenti .

Tipi

cromatografia di interazione idrofilo utilizza un polare legato fase stazionaria e una non polare , miscibile con acqua fase mobile per separare molecole basate sulla polarità . Questa tecnica ha la capacità di separare campioni acidi , basici e neutri in una singola fase di cromatografia chromatogram.Normal utilizza una fase stazionaria polare e una non polare , fase mobile non acquoso per separare isomeri strutturali (molecole con la stessa formula molecolare che hanno atomi legati insieme in modi diversi ) . cromatografia in fase inversa è il tipo più diffuso di HPLC . Esso utilizza una fase stazionaria non polare e una fase mobile acquosa po polare . Questo metodo è comunemente utilizzato da aziende farmaceutiche per qualificare farmaci prima cromatografia ad esclusione release.Size separa molecole base alle loro dimensioni e può anche determinare la struttura di cromatografia a scambio proteins.Ion è basato sulla attrazione tra gli ioni del soluto e siti praticati legato sulla fase stazionaria .
usi

HPLC è utile in una varietà di applicazioni . Può essere utilizzato per analizzare materiali farmaceutici , che è utile in ricerca di nuovi farmaci e purificare quelli esistenti . E 'anche usato per analizzare fluidi biologici , pesticidi , esplosivi e altri materiali . Anche se è una tecnica popolare per la ricerca biomedica , biochimica e farmaceutica , è utilizzato anche nei prodotti cosmetici, alimentari , industrie ambientali ed energetiche .