Cellule aderenti protocollo

cellule in coltura sono o una forma coltivate in sospensione , come le cellule del sangue , o cellule quali i fibroblasti che richiedono una superficie alla quale possono aderire . Alcune superfici possono richiedere rivestimento in diverse matrici extracellulari seconda del tipo di cellula e di studio . Tutte le colture cellulari richiedono di essere eseguite sono condizioni asettiche . Ambiente ottimale

La maggior parte dei tipi di cellule può essere coltivato in mezzo di Eagle modificato da Dulbecco ( DMEM ) o Roswell Park Memorial Institute ( RPMI ) con l'aggiunta di siero bovino fetale al 10 per cento , 2 milimoles del ammino acido glutammina e antibiotici , per esempio , 100 unità di penicillina e 0,1 milligrammi per millilitro streptomicina . Le cellule sono mantenute in loro media in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius e il 5 per cento di anidride carbonica .
Splitting

Le cellule devono essere controllate quotidianamente per l'infezione , la morte o la crescita . Una volta che il pallone di coltura tissutale è 80 per cento rivestito in cellule , le cellule devono essere divisi per mantenere la salute delle cellule e la fase log di crescita. Supporti vengono rimossi e le cellule sono lavate in tampone fosfato salino . Cellule aderenti richiedono l'aggiunta di tripsina e acido etilendiamminotetraacetico ( EDTA ) per rimuovere le proteine ​​di adesione cellulare . Agitazione Gentle dovrebbe rimuovere le cellule . Necessita di un supporto da aggiungere al neutralizzare la soluzione di tripsina /EDTA .

Trapianto

Le cellule diluiti e soluzioni tryspin /EDTA può essere centrifugata per pellet e lavaggio le cellule . Le cellule possono essere ri- sospese in media e diluiti e ripiastrate in nuovi palloni . Ogni volta che le cellule si dividono il numero di celle passaggio è aumentato di uno .
Stampa Cambia

media dovrebbe essere cambiato due volte la settimana , eliminando i vecchi media e la sostituzione con nuovo , riscaldato media.