Congelamento Cella Protocollo

Conservazione cellule attraverso il congelamento è essenziale per la ricerca , medicina veterinaria e allevamento di animali , perché permette alle cellule di essere conservati per lunghi periodi di tempo . Il metodo di congelamento selezionato , tuttavia , deve ridurre o prevenire danni alla cella . L'agente crioconservazione e metodo può dipendere dal tipo di cellula . Preparazione

Le cellule devono essere congelati quando sono sani e attivamente in crescita con una redditività del 90 per cento . Si deve prestare attenzione sulla gestione e centrifugazione ad alta velocità e pipettaggio vigoroso o aspirazione deve essere evitato per mantenere la vitalità e prevenire il danno cellulare .
Crioprotezione

Un agente crioprotezione è usato come una sostituzione per l'acqua intracellulare . L'agente impedisce cristalli di ghiaccio e disidratazione che si verificano nelle cellule . Glicerolo sterilizzato e dimetilsolfossido sterilizzati sono spesso utilizzati ad una concentrazione del 5 per cento al 15 per cento (volume per volume ) diluito in entrambi siero di vitello fetale o mezzi di crescita , a seconda del tipo di cellula .
Congelamento e conservazione

celle nella miscela di congelamento devono essere raffreddate lentamente. Se un congelatore programmabile non è disponibile , cryovials possono essere avvolti in tessuto o posto in polistirolo , che può rallentare il processo di congelamento . Le cellule devono essere conservati a meno 80 gradi centigradi per 24 ore e poi trasferiti in azoto liquido per la conservazione a lungo termine .

Sbrinamento

cellule congelati devono essere scongelati rapidamente. Un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius può essere utilizzato. Si deve prestare attenzione con le cellule stoccati in azoto liquido , tuttavia, come l'azoto liquido può entrare i flaconi e può esplodere scongelamento . La miscela di congelamento deve essere diluito in terreni di crescita . La vitalità cellulare deve essere valutata con il trypan colorante blu e le cellule sono coltivate come normale .