Come verificare la concentrazione di amilasi enzimi

enzimi amilasi sono prodotti nel pancreas e nelle ghiandole salivari e aiutano a digerire e carboidrati processo. Quando il pancreas diventa malato , amilasi viene rilasciato nel flusso sanguigno . Quando un paziente sta vivendo problemi del tratto digestivo o se c'è la malattia del pancreas , il medico prescriverà un esame del sangue per stabilire il livello di amilasi nel sangue . Il monitoraggio degli enzimi amilasi produrrà molte informazioni sulla progressione della malattia e gli effetti del trattamento . Cose che ti serviranno
UV /Vis
15 provette grandi
per provette
1 mg /ml soluzione di amido
deionizzata acqua
KI /iodio reagente
Pipettes
Dropper
Tissue
Cuvette
grafico carta
campione di sangue
Centrifuga
Cronometro

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Preparazione di un amido standard Curve
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Una Accendere lo spettrofotometro e impostarlo su una lunghezza d'onda di 620 nm . Lasciare che lo strumento si riscaldi per un minimo di 10 minuti in modo che la risposta sarà stabile durante l'esperimento .
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Impostare su sei provette , etichettarli 1-6 e metterli in un test cremagliera del tubo . Disporre le soluzioni di amido , acqua deionizzata e la soluzione di KI /iodio sul banco
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Riempire il tubo 1 con 3 ml di acqua deionizzata con una pipetta .; questo servirà come il vuoto . Riempire i tubi 2-6 con 3,0 ml , 2,9 ml , 2,7 ml , 2,4 ml e 2,1 ml di acqua deionizzata , rispettivamente . Aggiungi soluzione di amido a ciascuno dei tubi 2-6 nel seguente ordine : tubo 2 ottiene 0 ml , tubo 3 ottiene 0,1 ml , tubo 4 ottiene 0,3 ml , tubo 5 ottiene 0,6 ml e tubo 6 ottiene 0,9 ml
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aggiungere una goccia di soluzione di KI /iodio a ciascuno dei sei tubi . Mescolare accuratamente ogni provetta a fondo prima di registrare il loro assorbimento nel spettrofotometro .
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Riempire la cuvetta con la soluzione in bianco , pulire l'esterno della cuvetta e posizionarlo nel foro vuoto dello spettrofotometro . Regolare l'assorbanza zero . Tutte le altre soluzioni produrrà una assorbanza positivo .
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Riempire la cuvetta campione con ciascuno degli altri cinque soluzioni in volta . Pulire l'esterno della cuvetta prima di ogni misurazione . Registrare il valore di assorbanza per ciascun tubo . Sciacquare la cuvetta con la nuova soluzione almeno una volta prima di riempire per la prova .
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Fate un grafico che traccia le letture di assorbanza in funzione delle concentrazioni di amido . Questa è la curva standard che consente di determinare la concentrazione di una soluzione che ha una data lettura di assorbanza .
Determinazione amilasi Concentrazione
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Una Pulire tutte le provette da la prima parte del test . Conservare il tubo vuoto per un uso successivo .
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Ottenere un campione di sangue dal paziente . Trasferire il campione in una centrifuga e separare i globuli rossi dal plasma sanguigno .
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Riempire una provetta con 9 ml di acqua deionizzata e 1 ml di plasma sanguigno . Questa è una diluizione 1:10 del plasma . Mescolare il tubo accuratamente e pipetta 1 ml della soluzione in una seconda provetta . Etichettare i due tubi con il loro contenuto .
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Preparatevi ad eseguire un test cronometrato . Avere un cronometro a portata di mano e impostare sette provette con cuvette nel rack provetta. Si terrà letture ogni due minuti una volta che la prova inizia . Registrare il tempo esatto e lettura dell'assorbanza per ciascuno dei sette punti dati . Riempire ciascuno dei sette provette con 2 ml di acqua deionizzata .
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Aggiungere 9 ml della soluzione di amido nella provetta che ha la 1 ml della diluizione 1:10 di plasma . Non appena si inizia l'aggiunta della soluzione di amido , avviare il cronometro . Miscelare la provetta e dispensare 1 ml della soluzione di amido /plasma al primo dei sette provette . Registrare il tempo . Aggiungere 1 goccia di soluzione di KI /iodio nella provetta e mescolare .
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Trasferimento in cuvetta , pulire l'esterno e registrare l'assorbanza . Ripetere il processo con i restanti sei provette a intervalli di due minuti . Al termine della prova cronometrata si dovrebbe avere letture per il tempo reale e di assorbanza per gli intervalli di tempo di 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 e 12 minuti.
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utilizzare lo standard curva di trovare la concentrazione di amido per ciascuno dei sette punti dati . Questi punti saranno decrescenti con il tempo . L' amilasi digerisce l'amido e nel corso del tempo consuma tutto l'amido disponibile .
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grafico i punti di dati per la prova cronometrata la concentrazione di amido in funzione del tempo . La pendenza di questa curva indica la quantità di amilasi nel campione di plasma .