NBT Tenore Protocolli

NBT o nitro tetrazolio blu è un composto chimico usato in biochimica e immunologia per rilevare l' enzima fosfatasi alcalina . La sostanza è utilizzata anche nel test diagnosi della malattia granulomatosa cronica , che colpisce le cellule immunodefense . Protocolli di test NBT includono immunoblotting , soluzione di substrato per la fosfatasi alcalina BCIP /NBT e l'individuazione di galattosidasi e alcalini attività di fosfatasi nel tessuto . Immunoblotting

Immunoblotting è una tecnica utilizzata per individuare gli anticorpi , che sono proteine ​​coinvolte nel processo immunodefense , dice Susan R. Haynes in " protocolli di interazione RNA - proteine ​​. " Ciò include l'uso di NBT , così come albumina di siero bovino , anticorpi primari 9E10 , soluzione colorante Comassie , membrane di nitrocellulosa , soluzione tampone Tris base , ammonio per- solfato , sodio dodecil solfato e butanolo saturo d'acqua .

BCIP /NBT fosfatasi alcalina Substrate Solution

tecnici preparano una soluzione con tre gocce di 1 per cento 5 - Bromo - 4-cloro -3 - fosfato indolil ( BCIP ) , tre gocce di 1,5 per cento NBT , due gocce della sostanza chimica Levamisolo e fosfatasi alcalina ( AP ) tampone a pH 9,5 , secondo il sito IHC mondiale . La soluzione viene poi incubata a temperatura ambiente e sono disponibili per l'uso.
Rilevamento galattosidasi e fosfatasi alcalina Attività in tessuto

Galactosidases sono enzimi che possono rompere l' galattoside molecola , presente nei batteri Escherichia coli e altri organismi . Secondo Protocollo on-line , nel corso di questo protocollo , i biologi usano campioni di cellule di ratto trattati con soluzione PBS , glutaraldeide e paraformaldyde . Poi , si preparano il tampone di reazione bromo -cloro - indolil - galattopiranoside o X - gal per i campioni , utilizzando ferrocianuro di potassio , cloruro di magnesio , sodio desossicolato e il detersivo Nonidet P - 40 . I tecnici possono utilizzare nitro blu tetrazolio ( NBT ) , invece di ferrocianuro di potassio come alternativa più veloce . Campioni di cellule sono successivamente osservati al microscopio .