Come bloccare buffer

buffer di blocchi sono utilizzati per stabilizzare le proteine ​​rivestiti in analisi immunochimica e, secondo immunochimica Technologies, riducono il rumore nei risultati delle singole analisi , aumentare la sensibilità del saggio , aumentare l' efficienza e la durata delle piastre rivestite e migliorare la riproducibilità . Buffer di blocco inibiscono il legame non specifico dopo le proteine ​​e gli anticorpi si sono legati insieme e state assorbite sulla piastra di saggio rivestito nel corso di un ELISA ( un saggio immunoenzimatico ) . Poiché ELISA può essere costruito in diversi modi , ci sono diverse scelte di blocco buffer per soddisfare le esigenze individuali di un tecnico . Cose che ti serviranno
campione Anticorpo
Protein campione
piatto Assay
Blocking buffer di
Laboratorio bicchieri
Pipetta

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Seleziona il buffer di bloccaggio a seconda del tipo di ELISA si esibiranno . Scelte di tampone includono : bloccanti generali ( mammiferi proteina scaffold) per il panino e l'antigene -down ELISA; BB2 Nettuno blocco (proteina scaffold non- mammiferi ) per l'ELISA specie di mammiferi e dell'uomo; Synblocks BB3 (piccole , impalcature molecolari sintetiche) per l'alta resistenza ELISA blocking; e BB4 (piccole , sintetici, impalcature molecolari privo di fosforo ) elevato, non specifico coniugato marcato con enzima ELISA vincolanti libero - fosf . Il buffer bloccante BB4 è particolarmente utile in saggi che utilizzano fosfatasi alcalina , trattato chimicamente o piastre di reazione di vetro e in microfluidica , come riportato da immunochimica Technologies , una società che fornisce tutte le apparecchiature di analisi pertinenti .
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Rivestire la piastra di saggio con il tuo antigene ( proteine) o l'anticorpo versando la soluzione di tutti i piatti .
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Aspirare ( rimuovere) la soluzione di rivestimento inclinando la piastra così l'eccesso viene eliminato in un contenitore separato .
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Dispensare 300 a 400 microlitri di tampone di bloccaggio in ciascun pozzetto della piastra di dosaggio con una pipetta .
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Incubare le soluzioni per giro tre ore o durante la notte a temperatura ambiente (4 gradi Celsius) . Secondo la società Cell Technology , il buffer di blocco di destra si conserva tuoi reagenti , che può essere prezioso perché sono costosi e possono essere a scarseggiare .
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Lavare l'eccesso di proteine ​​per eliminare la quantità in eccesso come puo ' ridurre la rilevazione del vostro antigene bersaglio , come riportato da Pierce Net .
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a questo punto , la reazione è completa e si dovrebbe avere un piatto finito che contiene la giusta quantità di anticorpo legato all'antigene , che darà risultati coerenti e ridurre piastra - to-plate variazione in grandi saggi comparativi.
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nel caso di un microarray , utilizzare una soluzione avanzata di blocco come Array e ' Block It Buffer , che è stato progettato specificamente per inattivare eventuali gruppi reattivi che rimangono dopo un " stampa" di substrati su vetrini contenenti super- epossidica , super - ammina e super - aldeide mantenendo nitidezza del segnale risultante , impedendo fluorescenza e facilitare la riduzione del rumore . Questo reagente ha una durata di un anno se conservato correttamente , è estremamente puro e viene fornito come un concentrato pronto per l'uso .