Macchie occidentali protocolli

A Western blot sono un tipo di proteina macchia che viene utilizzato in campo medico, laboratori di biologia e altre discipline scientifiche su base giornaliera . Western blot , quando eseguita correttamente , sono un modo di studiare l'espressione della proteina in campioni di tessuto . Poiché ci possono essere differenze nei parametri di ciascun campione , ci sono una serie di protocolli da seguire per ottenere risultati accurati . Esecuzione di lava

Dopo incubazione le membrane nelle soluzioni di anticorpi per la giusta quantità di tempo , che varia a seconda di quale anticorpo soluzione viene utilizzato , EnCor Biotecnologie afferma che la membrana dovrebbe sottoporsi tre lavaggi a temperatura ambiente in TBS . TBS è una soluzione che ha una composizione specifica e pH per il lavaggio . La membrana deve essere lavato tra ogni introduzione di una nuova soluzione di anticorpi .
Preparazione della miscela di colorazione

Secondo WesternBlotting.org , preparare la miscela di colorazione immediatamente prima di applicare al membro otterrà i migliori risultati. Ci sono diversi tipi di soluzioni di colorazione , alcuni dei quali possono essere acquistati e alcuni dei quali devono essere miscelati in laboratorio . Chemiluminescenza colorazione , secondo EnCor Biotechnology , fornisce le informazioni più a macchia , ma è anche il più costoso e richiede una camera oscura per lo sviluppo . Perossidasi di rafano colorazione e fosfatasi alcalina Blotting sono altre opzioni per la colorazione . Indipendentemente dal metodo utilizzato , preparare la miscela appena prima dell'uso è essenziale .
Utilizzando un buffer

Dopo aver applicato la soluzione colorante selezionata , l'uso di un buffer è fondamentale . In chemiluminescenza colorazione , applicando un acetato sopra la parte superiore della soluzione colorante è protocollo , secondo WesternBlotting.org . Perossidasi di rafano colorazione richiede l'uso di un tampone acetato di ammonio per ottenere il prodotto di colorazione marrone . Il buffer utilizzato in fosfatasi alcalina Blotting , che dovrebbe creare un prodotto di colorazione viola , è più complicato da fare e può essere acquistato già fatto .