Cloramfenicolo Piatto Preparazione

Il cloramfenicolo è un antibiotico ad ampio spettro che uccide i microbi batteri interferendo con la loro capacità di replicare . Questo antibiotico è stato sviluppato inizialmente per combattere le infezioni negli esseri umani , ma , secondo Drug.com , è usato solo ora , a partire da questa pubblicazione , come ultima risorsa , quando altri farmaci non funzionano a causa di gravi effetti collaterali come l'anemia aplastica , anemia ipoplasico , trombocitopenia e granulocitopenia . Cloramfenicolo è utile in un laboratorio di ricerca per esperimenti di biologia molecolare . Quando cloramfenicolo viene preparato su un piatto , può essere utilizzato per rilevare la concentrazione batterica o per isolare ceppi specifici di batteri per ulteriori esperimenti . Cose che ti serviranno
acqua distillata
cloramfenicolo
1,0 per cento tryptone
estratto di lievito 0,5 per cento
1,0 per cento di cloruro di sodio ( NaCl ) pH 7,0
il 95 per cento di etanolo
Agar
pallone da 2 litri
magnetico piastra di agitazione
di media grandezza magnetica stirbar
lattice o nitrile
scala Laboratorio
Autoclave
30 sterili 10 centimetri piastre
Blue marcatura penna
Parafilm
foglio di alluminio
nastro Autoclave

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1

Indossare un paio di guanti in lattice o nitrile per preparare il brodo LB . Brodo LB è una abbreviazione comune per lisogenia brodo o brodo Luria , ed è utilizzato come un mezzo di crescita per la coltura di batteri . Esso può essere fatto da zero in laboratorio , o per risparmiare tempo si può essere acquistato da qualsiasi biologia molecolare magazzino fornitore .
2

Mettere un foglio di carta pesa sulla bilancia. Premere il pulsante di azzeramento della scala in modo che il peso della carta non è incluso nel peso finale . Aggiungere piccole quantità di tryptone alla volta , fino a raggiungere il 10 g . Poi piegare la carta pesare a metà con il triptone al centro . Prendete la carta pesare e cura usare la carta piegato come un imbuto per aggiungere il tryptone al pallone 2 L . Seguire questa procedura per pesare 5 g di estratto di lievito , 10 g di NaCl , e 15 g di agar .
3

Eliminare l'ancoretta nel pallone e centrare il pallone sulla piastra di agitazione magnetica . Aggiungere acqua distillata fino a portare la soluzione a 1 litro .
4

Ruotare la piastra scalpore su , e guardare il ancoretta . La piastra deve essere impostato alla giusta velocità per consentire l'ancoretta di muoversi a un ritmo moderato , senza rimanere bloccati sulle pareti del pallone . Regolare le impostazioni , se necessario. Lasciare che la soluzione di sedersi sul piatto fino a quando tutti i reagenti sono dissolti .
5

Spegnere la piastra di agitazione , e allungare un pezzo quadrato da 3 pollici del parafilm sopra la parte superiore del pallone , a coprire e proteggere il pallone da eventuali contaminanti o da versare. Poi coprire parafilm con un pezzo di foglio di alluminio e aggiungere un pezzo di nastro di marcatura autoclave in cima al foglio .
6

Mettere la soluzione in autoclave a ciclo liquido per 20 minuti a 15 psi per sterilizzarlo .
7

Togliere il pallone dal autoclave . Sarà molto caldo . Lasciare che la soluzione si raffreddi fino a circa 55 gradi centigradi , lasciando riposare a temperatura ambiente , o mettendo il pallone in un bagno a 65 gradi celsius acqua .
8

Spray e pulire il lavoro superficie con il 95 per cento di etanolo per evitare la contaminazione . E 'anche una buona idea per cambiare i guanti prima di maneggiare le piastre .
9

Mark lato e il coperchio di ogni piatto con verticale fascia blu con il pennarello . Questo indica le piastre contengono LB brodo e cloramfenicolo .
10

Aggiungi abbastanza antibiotico cloramfenicolo alla soluzione in modo che la concentrazione raggiunge l' importo desiderato , a seconda dei batteri che si dovrà lavorare con . Una concentrazione finale comune è 100ug/ml . Per questa concentrazione , aggiungere 1 ml di cloramfenicolo magazzino ( a 25mg/ml ) . Agitare il pallone in un movimento circolare , o rimetterlo sul piatto magnete mescolare per 1-2 minuti per assicurarsi che sia ben amalgamato .
11

Pulire la bocca del pallone con etanolo , quindi versare la soluzione in piastre , finché non vengono riempiti a metà con la soluzione . Lasciate che i piatti si induriscono , coprono ogni piatto con un coperchio e conservare a testa in giù a 4 gradi centigradi per evitare che si secchi .