Co - immunoprecipitazione protocollo

protocollo Co - immunoprecipitazione ( Co - IP ) è una procedura ampiamente utilizzata per analizzare interazioni proteina . La procedura è generalmente costituito da tre fasi . Un anticorpo viene introdotto un lisato cellulare , il complesso anticorpo - proteina è chimicamente legato e la proteina è individuato mediante un'analisi . Riepilogo Co - immunoprecipitazione

Co- IP è composto da una serie di misure per garantire risultati accurati . Il primo passo richiede un anticorpo specifico per la proteina da aggiungere . Nella seconda fase , proteina- G o proteina A - sefarosio è utilizzato per legare il complesso anticorpo - proteina . Infine , il sequenziamento una banda di proteina purificata , o l' analisi Western blot , viene utilizzato per identificare la proteina co -precipitata .
Procedura generale

Il protocollo può essere diviso in tre passaggi generali in termini di meccanica del processo . Il primo passo è flusso di lavoro per completare la procedura nel minor tempo possibile . Il secondo passo è considerazioni generali per la procedura . Il passo finale è la risoluzione dei problemi .
Passaggi specifici

Il flusso di lavoro inizia con la preparazione della coltura per l'analisi tamponando e si conclude con la determinazione della presenza di proteine ​​. Considerazioni generali costituite da gradini chiave come pre - pulizia , la scelta del buffer e selezione di proteina A o proteina G resina . Risoluzione dei problemi occupa di questioni quali nessuna rilevazione di proteine ​​, legame degli anticorpi alle proteine ​​, frammenti di anticorpi e la possibilità di un insuccesso Co - IP .