Come fare piastre di agar LB

Agar è una sostanza gelatinosa , prodotto da alghe rosse e utilizzati per una varietà di scopi. Uno dei suoi usi comuni è come mezzo di coltura per batteri . LB agar agar nutriente è che è stato combinato con lisogenia brodo ( LB ) . E 'un errore comune che LB sta per Luria - Bertani . Tuttavia, il suo inventore , Giuseppe Bertani , afferma nel suo articolo " lisogenia a metà del XX secolo : P1 , P2 , e altri sistemi sperimentali ", che le iniziali sono sempre stati destinati a stare per lisogenia brodo, non il suo nome e quello del suo coresearcher , Salvador Luria . LB agar è versatile e abbastanza semplice da fare . Cose che ti serviranno
Per 1 L di mezzo finito:
Scala e documenti di peso o vassoi
1 -L cilindro graduato
1 L di acqua distillata o deionizzata
2 -L beuta
10 g tryptone
5 g di estratto di lievito
5 g noniodized sale da tavola
15 g di agar
foglio di alluminio
presine impermeabile
autoclave o pentola a pressione
sterile Petri piatti

Mostra Altre istruzioni
1 Utilizzare una beuta che contiene il doppio del volume del mezzo che si intende preparare.

Posizionare il tryptone , estratto di lievito e sale nella beuta .
2 Prestare particolare attenzione alla pressione di autoclave o pentola a pressione durante la sterilizzazione .

Aggiungere l'acqua distillata o deionizzata e signore o agitare per sciogliere la maggior parte degli ingredienti secchi .
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Aggiungere l'agar e continuare a scuotere o mescolare . Tutto il agar non si dissolvono, ma è importante che si ottiene la maggior parte in soluzione. Evitare grandi ciuffi di non disciolto agar stabilirsi nella parte inferiore del pallone .
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Sigillare l'apertura del pallone con un foglio.
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Porre il pallone in autoclave - contenitore di sicurezza.
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Versare circa 1 cm di acqua nel contenitore .
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Mettere il recipiente e pallone in autoclave . Impostare l'autoclave per un ciclo liquido e sterilizzare per almeno 20 minuti. Se si utilizza una pentola a pressione per la sterilizzazione , andare al punto 8 . Altrimenti , passare al punto 10 .
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Se si utilizza una pentola a pressione , mettere una piccola quantità di acqua nella pentola e mettere il pallone in acqua . Non tentare di sterilizzare più di 250 ml alla volta utilizzando questo metodo.
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Portare la pentola a pressione per circa 20 psi e sterilizzare per 30 minuti circa .
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Togliere il pallone dal autoclave o pentola a pressione , facendo attenzione in quanto il pallone sarà abbastanza caldo .
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Agitare il pallone con delicatezza una volta la sterilizzazione è completato. Questo distribuirà l'agar in modo più uniforme in tutta la vostra soluzione .
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Mettere il pallone su una superficie adatta e lasciarlo raffreddare un po ' . Se avete preparato 1 L o più di media , dargli un vortice dolce ogni 10-20 minuti. Sarete in grado di dire che il mezzo si è raffreddato a sufficienza quando si può tenere la parte posteriore delle dita contro il pallone per circa 2 secondi senza che sia scomodo caldo al tatto . Attendere circa 15 a 20 minuti prima di tentare questo .
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Posizionare una piastra di Petri su una superficie piana . Sollevare delicatamente il coperchio in un angolo , in modo che la maggior parte del piatto è rimasto coperto. Non sollevare il coperchio direttamente dalla piastra .
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Versare il terreno dal pallone nella capsula di Petri fino a quando il piatto è pieno per metà .
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sostituire immediatamente il coperchio , spostare la piastra da parte e passare alla successiva fino a quando tutti i piatti desiderati sono stati riempiti . Le piastre completeranno la loro solidificazione in circa 30 minuti .
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Porre le capsule di Petri nel sacchetto sterile nel quale sono arrivati ​​o in un altro contenitore sterile adatto se non li vaccinare subito. Sigillare il contenitore per conservare l'umidità . Etichettare le piastre se lo desideri. Se si memorizzano le piastre , devono essere mantenuti a una temperatura di circa 39-40 gradi F.