Come macchiare gel di agarosio

Visualizzazione di acido nucleico o proteina è essenziale nello svolgimento elettroforesi su gel di agarosio . Se si lavora senza macchiare il gel , non sarà in grado di vedere dove il campione si sta testando ha raggiunto , e quindi misure di dimensioni molecolari , per esempio , sarà fortemente limitata . Macchiare il gel utilizzando un comune , colorante ben sperimentato , ad esempio etidio bromuro ( EtBr ), che reagisce sotto raggi ultravioletti ( UV) quando intercalate nel DNA o RNA molecole. Il colorante vi aiuterà a eseguire l'esperimento , mostrando le molecole nel campione come segni blu scuro . Cose che ti serviranno
guanti e occhiali
gel di agarosio
etidio bromuro
pipette ( Gilson per piccole quantità )
buffer di caricamento

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Indossare guanti di sicurezza che sono sottili , ma di protezione e consentire le dita e le mani di movimento senza restrizioni . Utilizzare una piccola pipetta per trarre alcune EtBr ( o macchia equivalente ) dal suo contenitore .
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Aggiungere 0,5 microgrammi per millilitro di vostra macchia scelto per il vostro campione . Coprire il campione e mescolare manualmente . Diversi frullati dovrebbero essere sufficienti .
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Aggiungi un tampone di caricamento carica negativa per il mix con una pipetta . In questo modo il campione colorato per essere visto ad occhio nudo , in luce naturale ed elimina la necessità di costosi , dannosi raggi UV che altrimenti degradare le molecole in cui si è interessati . Xilene cyanol è un tampone di caricamento comunemente usato , ma altri sono disponibili . Assicurarsi di aver selezionato un buffer di caricamento che verrà eseguito alla stessa velocità come la molecola si sta misurando . Xilene cyanol funziona alla stessa velocità frammenti di DNA che sono 5000 coppie di basi (bp) di lunghezza.
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Utilizzare una pipetta pulita per applicare il campione migliorato per i pozzi all'inizio del vostro gel di agarosio . Il volume di applicare dipende dalle dimensioni dei pettini ( ben spessore e lunghezza e spessore gel ) . Macchiare il vostro campione e non il controllo in modo che sia possibile determinare i parametri che ti interessano ( ad esempio peso molecolare ) in modo corretto ed efficace .
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In alternativa , eseguire Southern Blotting come un modo di visualizzare il vostro campione . Trasferire il DNA di una membrana di nitrocellulosa . Esporlo a una sonda di ibridazione . Questa non è la colorazione, in quanto tale , ma fornisce una valida alternativa , come descritto da Access Excellence .