Scopo del Protein Expression Analysis

Lo studio delle proteine ​​è una procedura importante in biologia , effettuata sia in laboratori diagnostici e di ricerca nel mondo accademico e dell'industria . Diagnostica analisi di espressione proteica è usato per rilevare la presenza di malattie o condizioni fisiologiche anormali . Nella ricerca viene utilizzato nella produzione di proteine ​​bio - ingegnerizzato per ulteriori studi scientifici o nello sviluppo di farmaci . Protein Expression

L'espressione delle proteine ​​è molto semplicemente la produzione di una proteina da una sequenza amminoacidica definita , che è a sua volta determinata da una sequenza genica definito . La comprensione di queste sequenze permette un investigatore di modificare una proteina in modo diverso - per esempio , posizionando un tag fluorescente sulla proteina in modo che possa essere rilevato , o rimuovendo porzioni della proteina che possono interferire con la produzione o la trasformazione da una cellula .

Metodi e strumenti per l'analisi delle proteine ​​Expression

espressione della proteina viene analizzato utilizzando tecnologie e procedure , come ad esempio ELISA , Immunoassays , spettrometria di massa altamente sofisticati e specializzati , e di imaging . Nella maggior parte dei casi la proteina viene rilevato indirettamente - per esempio, utilizzando un anticorpo che si lega ad esso e quindi utilizzando un sistema di rilevamento secondaria di visualizzarla . Una tecnica di base rilevazione delle proteine ​​è quello di Western blotting , durante il quale una proteina viene eseguito attraverso un gel di agarosio e poi trasferito su una membrana . Viene poi " sondato ", consentendo un anticorpo di legarsi ad esso , e l'anticorpo viene poi fatto reagire con una soluzione chimica , come ad esempio una macchia d'argento , per produrre un'immagine della posizione della proteina sulla blot . Questo dà un'indicazione della dimensione della proteina e se è presente come multiple o singole unità . Un altro metodo comunemente usato è rilevazione fluorescente . Il legame di un anticorpo etichettato con una particella fluorescente alla proteina permetterà di essere visualizzato al microscopio .
Allo scopo di analizzare Protein Expression

Studiare l'espressione di una proteina dà un investigatore un'indicazione di dove si produce (ovvero il suo modello di espressione e localizzazione) o suoi quantità (ossia , il suo tessuto o livelli cellulari ) . Questa informazione viene utilizzata in patologia diagnostica , ad esempio , la rilevazione di proteine ​​urinarie per determinare se un paziente ha malattie renali come la malattia tubulare renale o nefropatia diabetica . Nei laboratori genetici esperimenti di clonazione del gene di solito generano ricombinante ( geneticamente modificati ) proteine. L'analisi di queste molecole sintetiche è cruciale per verificare sequenze di geni o di controllo per le mutazioni che possono o non possono essere desiderabile . Ad esempio , i vaccini sono proteine ​​prodotte da unità artificialmente modificati di geni . Queste proteine ​​devono essere analizzati con attenzione per garantire che i geni sono stati modificati in modo corretto e desiderato , in modo da evitare collaterali indesiderati o effetti tossici .
Protein Expression Analisi mediante Western Blotting

L' analisi dell'espressione della proteina mediante western blotting è una procedura di laboratorio molto routine eseguita affinché scienziati di valutare la clonazione di geni e produzione di proteine ​​ricombinanti . Ad esempio , nella biologia molecolare e dell'ingegneria genetica , geni di specie diverse (come topo e umani ) sono uniti insieme e messi in una cellula batterica , che è capace di esprimere la proteina . Al fine di garantire che la generazione della proteina corretta , la sua espressione deve essere analizzato mediante western blotting . Western blotting è utilizzato anche in patologia medica per diagnosticare la malattia della mucca pazza e l'HIV .
Protein Expression Analysis mediante citometria di flusso

flusso richiede della citometria cellule da colorati con un immunofluorescenza , che si lega ad una proteina espressa sulla superficie o all'interno di una cella . E 'utilizzato nella ricerca farmaceutica per trovare molecole (citochine) che sono uniche per un insieme specifico di cellule e coinvolte nella segnalazione cellulare e comunicazione . Questo è importante in modo che l'effetto dei farmaci sulla fisiologia cellulare normale e funzione può essere monitorato durante lo sviluppo di farmaci e test clinici .