Tecnica perfusione

La tecnica di perfusione fornisce una fissazione rapida e uniforme per tutte le singole cellule presenti nel tessuto . A 4 per cento paraformaldeide fissativo viene passato attraverso il sistema vascolare avere tessuto di interesse . Il sito bersaglio principale per la somministrazione del farmaco in un particolare organo può essere identificato con l'aiuto di questa tecnica . Perfusione ha anche aiutato gli scienziati a comprendere l'organizzazione strutturale e funzionale del cervello umano . Cose che ti serviranno
animali ( ratti o scimmie )
pompa di perfusione , coppa
fissativo ( paraformaldeide 4 per cento )
siringhe aghi
perfusione flebo impostato
Forbici
Scalpel
Pinze
0,9 per cento salina
Ice box

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1

Prepara il fresco 4 per cento paraformaldeide mescolando 40 g di paraformaldeide in 800 ml di acqua . Riscaldare la soluzione a 60 ° C sotto agitazione. Raffreddare la soluzione a 4 C. Regolare il pH a 9,5 con l'aiuto di un pHmetro . Per regolare il pH , aggiungere acido acetico glaciale per ottenere il pH desiderato
2

Impostare la pompa di perfusione ; . Collegare tutte le parti in vetro e un ago perfusione . Eseguire 100 ml di acqua di rubinetto attraverso il tubo della pompa di perfusione per rimuovere eventuali residui dai cristalli . Posizionare un bicchiere di fissativo in una scatola di ghiaccio .
3

Aprire l'estremità del tubo di perfusione e metterlo in un bicchiere fissativo . Ridimensionare il volume della soluzione secondo la taglia dell'animale . Ora regolare la valvola della pompa di perfusione a un lento , gocciolamento costante. Chiudere la valvola . Riempire l'apparecchio perfusione con 0,9 per cento (peso /volume) di soluzione salina .
4

Impostare gli strumenti di chirurgia , vicino al tavolo operatorio . Un'iniezione anestesia all'animale in base al suo peso corporeo ( ketamina 0,5 mg /kg ) . Mettere l'animale sul tavolo operatorio con la schiena verso il basso .
5

Fare un taglio con un bisturi , per tutta la lunghezza del diaframma . Con le forbici grandi , lato smussato verso il basso , tagliare il tessuto connettivo nella parte inferiore del diaframma . Esporre il cuore . Tenere il cuore pulsante con le pinze e inserire un ago nel ventricolo sinistro .
6

Aprire la valvola della pompa di perfusione per consentire il flusso di soluzione salina allo 0,9 per cento . Assicurarsi che la soluzione è scorrevole e l'animale è vivo . Il cuore della animale deve essere battere continuamente . Una volta che il sangue è sostituita dalla soluzione salina , cambiare la soluzione di paraformaldeide 4 per cento .
7

Arrestare la perfusione e sezionare un tessuto di interesse . Tenere tessuto stesso mezzo a 4 ° C.