Come misurare catalasi Concentrazioni

catalasi è un biologico ( organico) catalizzatore. Questo enzima è uno dei più potenti catalizzatori noti e ha effetti benefici sul corpo umano ed è fondamentale per la vita . Catalasi agisce come un catalizzatore per accelerare la scomposizione del perossido di idrogeno . Il perossido di idrogeno è un sottoprodotto metabolico che è tossico per le cellule , se non rimosso . Catalasi aiuta a rompersi perossido di idrogeno in acqua e ossigeno . La catalasi aiuta anche a ossidanti altre tossine come i fenoli , acido formico , formaldeide e alcoli . Cose che ti serviranno
Due 110 ml di cromogeno in tampone fosfato
300 substrato ml - 30% di perossido di idrogeno
400 μL.HRP - perossidasi di rafano in tampone fosfato
60 ml di fosfato tampone
250 mL di campione diluente tensioattivo in tampone fosfato
Two 30 mL di substrato tampone diluente fosfato
Two 30 ml di reagente di arresto - sodio azide
Due flaconi 160 U /fiala standard di catalasi
spettrofotometro
10 microlitri pipette regolabili
1 centimetro percorso di lunghezza cuvette spettrofotometriche
1,5 microtubi in polipropilene ml con tappo a
provette - 12x75 millimetri ( 2,5 ml ciascuna )
Timer
acqua deionizzata

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Preparare il brodo di catalasi che sarete misurando con l'aggiunta di 200 microlitri ( microlitri ) di acqua deionizzata per le concentrazioni di catalasi a 50 millilitri ( ml ) flaconcini . Il livello di concentrazione Catalese dovrebbe essere 160 unità per millilitro ( U /ml) .
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Aggiungere 30 ml di catalasi diluito nelle provette . Aggiungere 500 microlitri del substrato ( perossido di idrogeno - 10 millimetri H2O2 ) in ciascuna provetta . Fare attenzione a non schizzare il perossido di idrogeno quando si lavora con esso .
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Incubare ogni singola provetta per un minuto a temperatura ambiente .
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Aggiungere 500 & mu , L di reagente per ogni flacone . Cap ogni flacone e miscelare capovolgendo la fiala su e giù. Non agitare la miscela , agitare il flacone o mescolare con un oggetto.
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Aggiungere 20 microlitri di ogni miscela di reazione nelle provette . Aggiungere 2 ml di reagente HRP in ogni provetta . Ancora una volta , mescolare la soluzione invertendo le provette diverse volte .
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Incubare nuovamente la soluzione , questa volta per 10 minuti a temperatura ambiente .
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Leggere l' assorbanza livello della soluzione con uno spettrofotometro . Le misure spettrofotometro luce lunghezze d'onda per determinare esattamente quali sono presenti e quindi cosa concentrazioni di sostanze. Questo metodo fornisce una lettura accurata delle concentrazioni catalasi . L'informazione è utile nel contesto dell'interazione di catalasi con perossido di idrogeno , come in questo esperimento , e come avviene naturalmente nel corpo umano .