Cellule aderenti Protocol

Le cellule in coltura sono o una forma in coltura in sospensione, come le cellule del sangue, o cellule come i fibroblasti che richiedono una superficie a cui possono aderire. Alcune superfici possono richiedere rivestimento in differenti matrici extracellulari seconda del tipo di cellula e di studio. Tutte le colture cellulari richiedono da eseguire sono le condizioni asettiche. Ambiente ottimale

La maggior parte dei tipi di cellule possono essere coltivate in mezzo di Eagle modificato da Dulbecco, (DMEM) oppure Roswell Park Memorial Institute (RPMI) con l'aggiunta di 10 percento siero fetale di vitello, 2 milimoles della glutammina e antibiotici, per esempio, 100 unità di penicillina e 0,1 milligrammi per millilitro streptomicina. Le cellule sono mantenute nel loro media in un incubatore umidificato a 37 gradi centigradi e il 5 per cento di anidride carbonica.
Splitting

Si controlli che tutti i giorni per l'infezione, la morte o la crescita . Una volta che il pallone di coltura tissutale è 80 percento rivestita in celle, le celle devono essere suddivisi per mantenere la salute delle cellule e la fase logaritmica di crescita. Supporti vengono rimossi e le cellule vengono lavate in tampone fosfato salino. Cellule aderenti richiedono l'aggiunta di tripsina e acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) per rimuovere le proteine ​​di adesione cellulare. Agitazione dovrebbe rimuovere le cellule. Supporti deve essere aggiunto per neutralizzare la soluzione di tripsina /EDTA.
Trapianto

Le cellule diluiti e soluzioni tryspin /EDTA possono essere centrifugati a pellet e di lavaggio le celle. Le cellule possono essere ri-sospese in media e diluiti e ripiastrate in nuovi flaconi. Ogni volta che le cellule si dividono il numero passaggio cellule è aumentato di uno.
Media cambia

I terreni devono essere cambiati due volte a settimana, rimuovendo i vecchi media e la sua sostituzione con nuovo, riscaldato media.