Competitive Binding protocollo del saggio

Il saggio di legame competitivo è un esperimento che determina la capacità di legame delle proteine ​​o prodotti chimici per proteine ​​specializzate trovati su una superficie cellulare , chiamati recettori. Il metodo è spesso utilizzato nella ricerca medica , ma è anche in grado di determinare quali farmaci si legano ai recettori e modificare l'attività del recettore , che a loro volta possono alterare il comportamento cellulare . Cella Preparazione

risospendere le cellule in fosfato ghiacciata soluzione salina tamponata ( PBS ) . Concentrazione proteica Misura per confermare i livelli di proteina pari utilizzando un saggio specializzato proteine ​​disponibile in commercio .
Assay

Aggiungi una proteina radioattività marcato noto per legarsi al recettore , il ligando , alla cella o sospensione tessuto . Aggiungere il concorrente , che è il farmaco test o proteina studiata e incubare con il ligando radioattivo e sospensione cellulare . Una gamma di concentrazioni del farmaco di prova dovrebbe essere studiato . Dopo l'incubazione , separata legato e non legato ligando e misurare la radioattività .
Dati Analisi

La misura usuale da determinare è la metà della massima concentrazione che inibisce il recettore altrimenti noto come IC50 . Questo è calcolato riportando le concentrazioni su scala logaritmica sull'asse X di un grafico mentre l'asse Y rappresenta la percentuale di inibizione , una curva sigmoide , che è una forma a S , dovrebbe essere generato . La IC50 è il punto di inibizione del 50 per cento , e la concentrazione corrispondente è possibile leggere dal grafico .