Nozioni di base di PCR

Polymerase Chain Reaction (PCR) è un metodo di replicazione del DNA. Il metodo è chiamato dopo DNA polimerasi, un enzima usato per catalizzare il processo di replicazione del DNA. Kary Mullis ha sviluppato la tecnica nel 1984 ed è stato insignito del Premio Nobel per la chimica per i suoi lavori nel 1993. Applicazioni della PCR

applicazioni comuni di PCR comprendono DNA fingerprinting (in cui frammenti di DNA vengono isolati e confrontati con i dati esistenti), l'analisi di quantità estremamente piccole di esempio (che consente agli scienziati di ricostruire organismi estinti e defunti storici cifre) e la diagnosi delle malattie (tra cui il DNA virale e la ricerca sul cancro)
PCR Componenti

Componenti necessari e reagenti di una reazione di PCR sono:. DNA genomico (il modello da replicare); due primer (uno avanti e uno indietro) omaggio alla sequenza di DNA stampo; un cocktail di reazione (compresi Taq polimerasi e una soluzione tampone che fornisce un ambiente vitale in cui avverrà la reazione), e il substrato per l'enzima Taq . (nucleotidi che aiuteranno "costruire" i singoli fili) economici
Passi di PCR

Le fasi della reazione sono: denaturazione (durante il quale la temperatura è sollevato per separare i filamenti di DNA template); ricottura del primer (durante il quale la temperatura viene raffreddato per favorire sequenze primer liberamente flottante di aderire a isolate DNA templato filamenti) e di estensione (durante la quale i Taq polimerasi aderisce al fondo e utilizza libera nucleotidi-flottanti da replicare ogni isolato DNA template strand). Ripetendo questo processo più volte isolerà ogni sequenza replicato dal suo modello di DNA originale. Ogni ripetizione esponenzialmente aumenta la quantità di DNA replicata finché vi è una quantità sufficiente per l'esperimento desiderata. Per la temperatura ottimale e di altre condizioni, vedere "Progettazione Programmi PCR" di Yale nel Resources, qui di seguito.
Stadi della PCR

La reazione può anche essere descritta in tre fasi : Amplificazione (durante il quale il DNA è replicato in modo esponenziale); Livello-Off (durante il quale la polimerasi Taq perde attività); e plateau (momento in cui non più prodotto può essere prodotto nella reazione di corrente). Per una dimostrazione interattiva della reazione di PCR, vedi Università dello Utah "PCR Laboratorio virtuale" di risorse, qui di seguito.