Come preparare piastre di agar

Biologia molecolare e batteriologia utilizzano piastre di agar per la cultura microrganismi come i batteri per la sperimentazione. L'agar è l'agente che solidifica, o gel, un mezzo nutritivo liquido necessario dal microrganismo di sopravvivere e crescere. Una volta trasferiti ad una piastra di agar, i batteri crescono in colonie distinte (se coltivato a basse concentrazioni) o sbavature (se coltivata a concentrazioni elevate) e può essere raccolto per l'analisi. Biologi preparare piastre di agar, come il processo richiede l'accesso ai reagenti di laboratorio di grado e macchine e una buona conoscenza della biologia molecolare e delle tecniche sterili. Cose che ti serviranno
Guanti
Lab cappotto
Maschera viso
becco Bunsen
cappa a flusso laminare
sterili piatti
10g bacto-tryptone
5g estratto di lievito
15 g di agarosio
1 ml NaOH 1N
acqua distillata sterile
Bottiglia di vetro
Autoclave nastro
autoclave in integratori, ad esempio antibiotici come ampicillina
Mostra più istruzioni
1

Indossare equipaggiamento adeguato di protezione, compresi i guanti, un camice e una mascherina, e decontaminare tutte le superfici. Lavorare accanto ad un becco Bunsen o, preferibilmente, in una cappa a flusso laminare sterile. Questo impedisce inquinanti nell'aria al di cadere nella agar.
2

Rimuovere la pila di scatole Petri dalla confezione, ma tranne che per il reimballaggio le piastre di agar. Etichettare la superficie esterna del piatto (non il tappo) con il tipo di agar e la data di preparazione. Disporre i piatti come un unico strato con i coperchi rimossi per fare versando del agar più facile.
3

Mescolare il Bacto-tryptone, estratto di lievito e agarosio insieme e poi aggiungere l'idrossido di sodio (NaOH). Aggiungere acqua distillata sterile per ottenere 1 litro di terreni di coltura. Trasferire questa soluzione in una bottiglia di vetro con almeno 1.5L volume. Avvitare il coperchio della bottiglia ed etichetta la data di preparazione e il nome del supporto. Posizionare una striscia di nastro autoclave sulla bottiglia e autoclave per 25 minuti. Lasciate raffreddare la bottiglia per non inferiore a 45 gradi Celsius (o si indurisce prematuramente), ma non superiore a 50 gradi Celsius. È possibile conservare le bottiglie di agar raffreddato e solidificato a 4 gradi Celsius e poi caldo fino liquefatto. Se richiesto per il particolare esperimento o ceppo di batteri, aggiungere il tipo e la quantità di integratore come gli antibiotici appropriati. Se il supporto è troppo caldo, i supplementi saranno distrutti, in modo da controllare attentamente la temperatura del supporto prima di procedere.
4

Versare un volume sufficiente di agar per riempire a metà del piatto, mentre l'agar è ancora caldo e liquefatto. Assicurarsi che la superficie sia completamente coperto. Non versare una quantità eccessiva o lasciare che l'agar raggiungere la cima del piatto. Conservare le piastre in un ambiente sterile, consentendo il becco Bunsen o cappa a flusso laminare per l'esecuzione continua. Lasciare le piastre per impostare e quindi sostituire i coperchi.
5

Asciugare le piastre di agar per circa 30 minuti a un'ora in forno non superiore a 37 gradi Celsius. In alternativa, è possibile lasciare la cappa a flusso laminare per tre minuti o su un banco di laboratorio decontaminata in una zona a traffico limitato che non è piena di spifferi per un giorno o due. Asciugatura le piastre si ferma qualsiasi soluzione batterica posto sulla superficie agar da semplicemente diluendo fuori e scivolare, invece di formare colonie che si attaccano al agar.
6

conservare con cura le piastre al buio e al 4 gradi Celsius. Stack le piastre di agar secchi con il loro fondo per permettere di vedere chiaramente le etichette e per prevenire microrganismi e detriti cadano sulla superficie agar e li contamina. Mettete i piatti indietro nel loro imballaggio, coprire con un foglio di alluminio e nastro adesivo la chiusura dell'imballaggio. Etichettare i piatti confezionati con il loro contenuto e la data di preparazione. È possibile memorizzare le piastre per un massimo di due mesi e deve disfarsene dopo.