Come fare una mappa di restrizione

Nei primi giorni della biologia molecolare, gli scienziati comunemente usati mappatura di restrizione per capire i geni che stavano studiando. Nei moderni laboratori di ricerca, mappatura di restrizione è in gran parte obsoleto perché il sequenziamento è diventato più ampiamente disponibile e più economico rispetto al passato. Tuttavia, vi sono casi in cui una mappa di restrizione possono essere adeguati per un ricercatore per eseguire le indagini. L'approccio generale alla mappatura di restrizione prevede l'utilizzo di enzimi digestivi per abbattere fisicamente un campione di DNA. Una volta a misurare i prodotti di questa digestione, si può "riassemblare" i pezzi e dedurre la sequenza originale del DNA. Cose che ti serviranno
enzimi di restrizione
campione di DNA
Soluzione tampone
Ghiaccio e acqua calda bagno
gel elettroforesi attrezzature
Mostra più istruzioni
Digestione DNA
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Aggiungi un enzima di restrizione per il vostro campione di DNA. Utilizzare EcoR1, un enzima comunemente usato, per esempio.
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Aggiungi questa miscela in una soluzione tampone, che è essenzialmente un luogo per la reazione di verificarsi.
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Alzare la temperatura della reazione, come indicato nel manuale BioLabs New England. Ciascun enzima di restrizione ha una temperatura di reazione specifica alla quale funziona meglio. Inoltre, ogni enzima ha una sequenza nucleotidica specifica è progettato per indirizzare. EcoRI eseguirà la scansione e tagliare il DNA in sequenza CAATTC nucleotide. Questo ordine esatto di nucleotidi deve esistere per l'enzima di impegnare e tagliare il DNA. Fino a questo punto, tutti i materiali devono essere tenuti in ghiaccio per evitare che l'attività indesiderate.
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Dopo aver lasciato la reazione avvenga come indicato nel manuale, eseguire il composto in una macchina per elettroforesi su gel per separare il DNA frammenti in base alla taglia. I frammenti più piccoli si muoveranno più lontano attraverso il gel.
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Misurare la distanza percorsa da ogni frammento di DNA. Queste cinque fasi devono essere ripetute con più enzimi diversi separatamente.
Costruire la restrizione Mappa
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Utilizzando i dati ottenuti dal gel, raccogliere tutte le informazioni che avete trovato utilizzando i diversi enzimi di restrizione.
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dedurre l'ordine dei siti di restrizione confrontando le diverse lunghezze dei frammenti prodotti da ciascun enzima. Per esempio, se enzima # 1 prodotto due frammenti di uguale lunghezza e enzima # 2 ha prodotto tre frammenti di uguale lunghezza, si può concludere che enzima # 1 tagli a metà del DNA e l'enzima # 2 tagli il DNA in terzi.

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Utilizzando le conclusioni tratte nella fase 2, assemblare l'ordine dei siti di restrizione per il DNA.