PBMC Protocollo

crioconservati cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) sono una frequente fonte di campioni per la ricerca che include immunoterapie e le risposte ai vaccini. Mentre alcuni protocolli sono limitati a isolamento e congelamento fasi del processo, altri comprendono procedure scongelamento. Procedura di isolamento e di congelamento Procedura

Un composto commerciale per promuovere la separazione viene inserito in ogni provetta da centrifuga da 50 ml e le provette vengono centrifugate per trenta secondi. Tappi di tubi di sangue vengono spruzzati con alcool prima di aprire, poi sangue intero trattato con anticoagulante viene poi trasferito tramite pipetta nelle provette da centrifuga. Lo strato di plasma del sangue viene aspirato con una pipetta.
Congelamento

Le cellule dal passaggio precedente sarà poi centrifugato con soluzione fisiologica tamponata tre volte. Dopo una conta cellulare, i campioni saranno centrifugati poi sospeso in mezzo congelamento. I campioni in media congelamento sono accanto divise tra cryovials in una quantità mL. Flaconcini sono conservati durante la notte in un

-70 º C freezer e si trasferisce a lunga conservazione in azoto liquido il giorno successivo.
Sicura scongelamento

Crioprovette vengono trasferiti da azoto liquido a una temperatura di 37 º C bagnomaria e campioni è consentito per scongelare uno o due minuti. Un mezzo di trasporto caldi viene aggiunto ad ogni flacone. Sospensioni diluite viene centrifugato per sette minuti. Il numero e la vitalità cellulare sono controllate, se le cellule hanno bisogno di concentrazione, i campioni vengono centrifugati altri sette minuti. Il campione viene diluito a soluzione di lavoro e riposato per dodici a diciotto ore prima di iniziare l'esame del protocollo specificato

Referenze
  Biomed Central:. Protocollo per isolamento , Crioconservazione, e scongelamento dei PBMC
Network   per pancreatici donatori di organi con Diabete: Isolamento di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) economici Risorse
  Los Almos National Labs: Antibody Assay Soluzioni in PBMC
  degli scienziati: Isolamento linfociti da sangue intero.