Tissue Culture Punte

coltura tissutale è la propagazione di cellule in un mezzo di coltura liquido in laboratorio per vari scopi scientifici. Per esempio, colture di tessuti sono utilizzati nella diagnosi di malattie genetiche, come mezzo per la crescita di patogeni intracellulari come batteri o virus o nelle indagini sulle cellule stesse. Tissue Culture Cells

Alcune cellule aderiscono al fondo delle capsule di Petri o rimangono sospese nel liquido. Le celle possono essere di origine vegetale o animale. Cellule utilizzate nelle colture tissutali possono essere cellule primarie, nel senso che sono state raccolte direttamente da un organismo, o di una linea cellulare che è stato mantenuto in coltura. Le linee cellulari sono spesso le cellule tumorali, e questo deve essere considerato al momento di pianificare o di interpretare gli esperimenti.
Trattamento di cellule delicatamente

Cellule aderenti vengono rimossi dal loro capsula di Petri per il passaggio da raschiatura o con una proteasi, generalmente tripsina e EDTA. Raschiare uccide molte cellule e deve essere utilizzato solo quando si prepara lisati cellulari (preparati liquidi del contenuto della cella di analisi) o quando tripsina /EDTA deve essere assolutamente evitato.

Trypsinizing rimuove non solo le proteine ​​che aderiscono alle cellule di al piatto ma la maggior parte altre proteine ​​sulla membrana della cellula, anche. Cellule palla e prendere un po 'di tempo, di solito durante la notte, per ristabilire un legame con il piatto. Aggiunta di una minima quantità di tripsina - circa 1 mL di una fiaschetta 25cm2 - oscillare la beuta per cinque secondi o meno per rivestire il monostrato e poi travaso o aspirando la tripsina eccesso ridurrà la quantità di tripsina a cui è esposto il monostrato. Lasciare riposare le cellule in incubatore durante tripsinizzazione.

Dopo che le cellule scivolano via il fondo del piatto, aggiungere i media con il siero ed aspirare il lisato su e giù per la pipetta con delicatezza. Lasciare un po 'di supporto a rimanere nel piatto, come si pipettare su e giù diverse volte per spezzare grumi e ottenere una sospensione omogenea.

Non aspirare bolle nella pipetta. Inoltre, non mescolare vigorosamente o vortex la sospensione cellulare,. Delle cellule sono molto fragili in questo stato appallottolato
Per inattivare a caldo o non inattivare a caldo

Quando le tecniche di colture cellulari erano nella loro infanzia, siero fetale bovino (FBS) era noto per contenere proteine ​​del complemento, che sono proteine ​​del sistema immunitario che lisare cellule. Proteine ​​del complemento non sono desiderabili in coltura cellulare. Heat-inattivando FBS a 56 gradi centigradi per 30 minuti renderà proteine ​​del complemento inattivo. Preriscaldamento FBS a 37 gradi C è anche sufficiente per inattivare proteine ​​del complemento.

Nei primi giorni, il calore inattivando FBS anche uccisi micoplasmi e altri contaminanti. Al tempo, il filtro di sterilizzazione è stata effettuata con filtri 0.45um. Oggi, noi Filtro sterilizzare FBS e dei media attraverso filtri 0.1um o anche 0.04um. No micoplasma sarà scivolare attraverso quella

Questo ci lascia la questione se o non inattivare a caldo

inattivazione al calore degrada tutti i componenti della FBS -.. Quali vitamine, aminoacidi e fattori di crescita -. forse al di sotto della soglia per alcune linee cellulari schizzinoso

Se si sta lavorando con una linea di cellule a crescita lenta o schizzinoso, considerare semplicemente filtrata e sterilizzata tuo FBS. Si potrebbe trovare questo aumenta la robustezza delle vostre cellule.