Come faccio Line Up del DNA per l'analisi?

Elettroforesi su gel di agarosio è il metodo più comune di analisi del frammento di DNA visivo, che consente ai tecnici di discernere visivamente frammenti di DNA in base alle dimensioni. Il gel di agarosio sostiene un campo magnetico e, dal DNA ha una carica negativa, si muove verso il polo positivo del campo magnetico. Frammenti di DNA più piccoli si muovono più rapidamente attraverso il gel e frammenti più grandi si muovono più lentamente. Frammenti di DNA vengono fluorescenza colorate con un agente intercalante noto come etidio bromuro. Ciò permette la comparazione di diversi campioni di DNA elettroforesi su un gel. Cose che ti serviranno
Gel di agarosio, 0,7 per cento al 2 per cento
Tris-borato-EDTA (TBA), tris-acetato-EDTA (TAE), acetato di sodio litio (LA), acido borico (SB) tampone
etidio bromuro
Gel Loading Dye
Gel vassoio
elettroforesi camera
Guanti
protettiva occhio usura
Pipetta
elettroforesi pettine
Mostra più istruzioni
Preparazione di un 0,7 per cento di agarosio gel
1

Pesare 0,7 g di agarosio in polvere e poi posto in una grande beuta (250 ml).
2

Aggiungi 100ml di un 1X (forza normale) tampone (TAE, TBE, SB o tampone LB) per la beuta contenente la polvere di agarosio.
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microonde o calore utilizzando un becco Bunsen per circa un minuto fino a quando la soluzione diventa chiara e l'agarosio si è dissolto.
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Togliere il recipiente dalla fonte di calore e lasciare raffreddare per 55 a 60 gradi Celsius.
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Aggiungere 1 ml (microlitri) di etidio bromuro alla soluzione raffreddata di agarosio utilizzando una pipetta di dimensioni appropriate, di solito 1ml. Swirl la soluzione per mescolare.
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Versare il gel lentamente nel vassoio gel, garantendo che non vi è alcuna formazione di bolle durante questo processo. Se non ci sono dighe e non fornite con il vassoio gel, usare nastro adesivo per formare loro.
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Inserire un pettine elettroforesi attentamente nel gel, assicurando una posizione ferma e con l'orientamento corretto. Elettroforesi pettini può variare notevolmente dal numero di denti che hanno. Lasciare che il gel da impostare per circa 25 minuti
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Immergere il gel nella stessa buffer utilizzato per preparare la soluzione agaorse -., In questo caso, un buffer 1X. Immergere il gel in un massimo di 5 ml di tampone di corsa.
Preparazione e caricamento di DNA in gel di agarosio per l'Analisi
9

Trasferimento da 5 a 10 ml di il campione (s) dai loro tubi di reazione ai tubi freschi. Nel caso in cui si desidera utilizzare l'intera miscela di reazione, una nuova provetta non è necessario.
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Aggiungi tampone di caricamento 0,2 X a ciascuno dei vostri tubi campione fresco contenente il campione di DNA per il caricamento.

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Togliere il pettine elettroforesi lentamente, garantendo che non si rompono il gel o creare qualsiasi spazio tra il fondo del gel e il vassoio gel.
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Aggiungi a cinque a 12 microlitri di un marcatore DNA appropriato al primo pozzo creato dal pettine elettroforesi. O meno di un marcatore del DNA è appropriato dipende dalle dimensioni dei frammenti che ti aspetti dal tuo campione.
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Carico cinque a 10 ml di vostri campioni nei pozzetti rimanenti e aggiungi una pari importo dello stesso marcatore del DNA nel pozzetto finale.
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Inserire gli elettrodi all'interno della camera di elettroforesi collegando i fili nei connettori corretti nella camera e impostare l'elettrodo a 50 a 150 V.

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Lasciare che il gel di correre per una a quattro ore.
Analisi dei Risultati
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rimuovere il gel dalla camera di gel e posizionarlo sia in una camera UV per l'identificazione visiva, o posto in una macchina che è in grado di scattare una fotografia del gel.
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Misurare la distanza marcatori della migrazione nei loro pozzi.

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Plot le distanze nei confronti delle dimensioni delle bande su carta millimetrata semilogaritmica e disegnare la linea più idonea.
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calcolare le distanze dei tuoi gruppi sconosciuti.

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Stimare le dimensioni delle vostre band sconosciute tracciando una linea su dalla distanza percorsa da vostre band sconosciute che incontra la linea della misura migliore.
21

disegnare un'altra linea da questo punto di incontro oltre all'asse formato.