Tecnica perfusione

La tecnica di perfusione fornisce una fissazione rapida e uniforme per tutte le singole cellule presenti nel tessuto. Un fissativo paraformaldeide 4 percento viene passato attraverso il sistema vascolare per ottenere tessuto di interesse. Il principale sito bersaglio per la somministrazione dei farmaci in un particolare organo può essere identificato con l'aiuto di questa tecnica. Perfusione ha anche aiutato scienziati per comprendere l'organizzazione strutturale e funzionale del cervello umano. Cose che ti serviranno
animali (ratto o scimmia) per pompa di perfusione, coppa
fissativo (paraformaldeide 4 per cento) per gli aghi per siringhe
Perfusione flebo Set | Forbici
Scalpel
Pinze
0,9 per cento salina
Ice box
Mostra più istruzioni
1

Preparare fresca 4 per cento paraformaldeide miscelando 40 g di paraformaldeide in 800 ml di acqua. Riscaldare la soluzione a 60 C agitando. Raffreddare la soluzione a 4 C. Regolare il pH a 9,5 con l'aiuto di un pHmetro. Per la regolazione del pH, aggiungere acido acetico glaciale per ottenere il pH desiderato
2

Impostare la pompa di perfusione;. Allegare tutte le parti in vetro e un ago perfusione. Run 100 ml di acqua di rubinetto attraverso il tubo della pompa di perfusione per rimuovere eventuali residui dalle parti in vetro. Posizionare un bicchiere di fissativo in una scatola di ghiaccio.
3

Aprire la fine del tubo di perfusione e metterlo in un bicchiere fissativo. Scalare il volume della soluzione secondo la taglia dell'animale. Ora regolare la valvola della pompa di perfusione a un lento, gocciolamento costante. Chiudere la valvola. Riempire l'apparato di perfusione con il 0,9 per cento (peso /volume) di soluzione salina.
4

Impostare gli strumenti di chirurgia vicino al tavolo operatorio. Dare una iniezione anestesia per l'animale in base al suo peso corporeo (ketamina 0,5 mg /kg). Mettere l'animale sul tavolo operatorio con la schiena verso il basso.
5

fare un taglio con un bisturi, per tutta la lunghezza del diaframma. Con le forbici grandi, lato smussato giù, tagliare i tessuti connettivi al fondo del diaframma. Esporre il cuore. Tenere il cuore battere con le pinze e inserire un ago nel ventricolo sinistro.
6

Aprire la valvola della pompa di perfusione per consentire il flusso del 0,9 per cento soluzione salina. Assicurarsi che la soluzione è scorrevole e l'animale è vivo. Il cuore dell'animale deve essere continuamente battere. Una volta che il sangue è sostituita dalla soluzione salina, cambiare la soluzione di paraformaldeide al 4 per cento.
7

Fermare la perfusione e sezionare un tessuto di interesse. Tenere il tessuto nello stesso mezzo a 4 C. |