Competitive Binding Assay Protocol

Il saggio di legame competitivo è un esperimento che determina la capacità di legame di proteine ​​o prodotti chimici per proteine ​​specializzate presenti su una superficie cellulare , chiamati recettori . Il metodo è spesso utilizzato nella ricerca medica , ma è anche in grado di determinare quali farmaci si legano ai recettori e modificare l'attività del recettore , che a sua volta può alterare il comportamento cellulare . Cella di preparazione

Re- sospendere le cellule in fosfato ghiacciata soluzione salina tamponata ( PBS ) . Misurare la concentrazione di proteine ​​per confermare livelli uguali di proteine ​​usando una specializzata disponibile in commercio dosaggio di proteine ​​.
Assay

Aggiungi una proteina radioattività marcato noto per legarsi al recettore , il ligando , alla sospensione cellulare o tissutale . Aggiungere il concorrente , che è il farmaco di prova o proteina studiata e incubare con il ligando radioattivo e sospensione cellulare . Un intervallo di concentrazioni del farmaco test deve essere studiato . Dopo l'incubazione , ligando legato e non legato separata e misurare la radioattività .
Data Analysis

La misura usuale da determinare è la metà della massima concentrazione che inibisce il recettore altrimenti noto come IC50 . Questo è calcolato riportando le concentrazioni su una scala logaritmica sull'asse X di un grafico mentre l'asse Y rappresenta la percentuale di inibizione; una curva sigmoide , che è una forma a S , dovrebbe essere generato . La IC50 è il punto di inibizione del 50 per cento , e la corrispondente concentrazione può essere letto dal grafico .