Salute e malattia
citometria a flusso è uno strumento che è utile nello studio delle proteine cellulari . Esso utilizza l'emissione di luce o fluorescenza dalle proteine all'interno della cellula . Anticorpi o sonde contrassegnate con fluorescenza sono utilizzati per studiare proteine specifiche . Citometria a flusso è utilizzato per diagnosticare una serie di malattie , compreso il cancro , ma è anche utile nella ricerca medica . Celle di fissaggio
Le cellule devono essere fissati per mantenere la stabilità delle proteine intracellulari . Un numero di fissativi può essere utilizzato come formaldeide o acetone ghiacciato . Seguendo fissazione , la membrana cellulare deve essere permealized per consentire l'anticorpo di entrare nella cellula . Detersivi come Triton o NP -40 , o metanolo ghiacciata possono essere usati per fare i fori nella membrana cellulare .
Colorazione
Lavare le cellule nel buffer di blocco 0,5 per cento siero albumina bovina diluito in tampone fosfato , BSA /PBS . Le cellule vengono incubate in tampone di bloccaggio per ridurre il legame non specifico . Aggiungere l'anticorpo primario diluito in tampone di bloccaggio e lasciare incubare a temperatura ambiente , per lunghezza ottimizzata di tempo . Lavare con tampone di arresto .
Analisi
Incubare l'anticorpo secondario , che viene etichettato con un'etichetta fluorescente, a temperatura ambiente per 30 minuti . Per rimuovere le cellule di lavaggio anticorpo non legato in tampone di bloccaggio . Celle Spin in un pellet e poi risospendere in PBS e analizzare al citofluorimetro .
ricerca medica