MBP depurazione Protocolli

MBP o maltosio proteina di legame si trova nel batterio Escherichia coli , che fa parte della flora intestinale degli esseri umani e degli animali . La purificazione di MBP comporta una serie di procedure finalizzate a separare componenti della proteina . In biologia molecolare , MBP purificazione è un processo fondamentale per lo studio della struttura e funzione di questa proteina . Protocolli di purificazione MBP includono MBP proteine ​​fuse depurazione , su piccola scala MBP - fusion e maltosio proteina di fusione vincolante depurazione tag . MBP Fused proteine ​​Purificazione

Durante questo protocollo , i tecnici lavare 20 ml della resina polimerica con amilosio atris soluzione a pH 7,4 , cloruro di sodio , mercaptoetanolo ( ME ) e acido etilendiamminotetraacetico ( EDTA ) , secondo protocolli online. Campioni cellulari sono aggiunti , centrifugati e analizzati su gel elettroforesi . I campioni sono analizzati in un cromatografo , dove i tecnici dell'eluito o osservare costituenti della soluzione mentre passa attraverso la colonna cromatografia .
Small Scale MBP - fusione purificazione delle proteine ​​

Secondo l'Università Ebraica di Gerusalemme , biologi utilizzare il isopropilico reagente BD- 1 - thiogalactopyranoside ( IPTG ) , coltura cellulare centrifuga per 10 min a 8.000 giri al minuto a 39.2 gradi Fahrenheit . Successivamente , rimuovono surnatante liquido e mescolare tampone PBS freddo al campione , che è diviso in diversi tubi e centrifugato di nuovo . I campioni vengono quindi mantenuti a -112 gradi Fahrenheit per l'analisi posteriore .
Maltosio Binding Protein Fusion Tag purificazione

Affinità sono geneticamente molecole impiegate in biologia molecolare per rilevare e purificare proteine ​​. Questo protocollo è un insieme complesso di procedure diviso in tre fasi , che comprendono la costruzione di proteina marker poliistidina ( HisMBP ); un esperimento pilota per valutare la solubilità della proteina; e la purificazione su larga scala di molecole MBP , secondo natura protocolli . Oltre ai campioni di E.coli , tecnici utilizzare ampicillina , kanamicina , IPTG , anhydrotetracycline , monoidrato glucosio , tampone di lisi cellulare , la DNA polimerasi , PCR primer , Tris - acetato - EDTA e bromuro di etidio .