Cell- Based protocollo ELISA

ELISA o enzima Test immunoenzimatico , è usato come strumento diagnostico in medicina e nella ricerca biologica per quantificare la quantità di una proteina specifica . ELISA utilizza anticorpi per rilevare la proteina di interesse e un reagente che produce un colore . La quantità di colore si riferisce alla quantità di proteina . Cultura cellulare

Le cellule devono essere inseriti in pozzetti di una piastra a 96 pozzetti con 100 microlitri di media di crescita e le cellule lasciate riposare una notte . Se stai studiando la reazione delle cellule di un fattore, le cellule dovrebbero essere siero -fame per 24 ore e poi stimolate con il fattore in studio .
Fissazione e Anticorpo primario

Dopo la rimozione del supporto , le cellule vengono trattate con un fissatore come 3 per cento formaldeide , o metanolo . La membrana cellulare deve essere permeabilizzate per consentire l'anticorpo di penetrare nella cellula. Permeabilizzazione può essere ottenuto mediante l'uso di 0,1 per cento Triton , se non è già stata utilizzata metanolo . Il legame non specifico può essere evitata con l'uso di siero di vitello fetale al 10 per cento diluito in soluzione salina tamponata con fosfato . Dopo la rimozione del blocco , l'anticorpo primario può essere applicato e incubato per un'ora .
Anticorpo secondario e Stain

Rimuovere l'anticorpo primario , e lavare tre volte. Aggiungere un anticorpo secondario legato ad un agente di rilevamento , ad esempio perossidasi di rafano . Incubare per un'ora . Washington Aggiungi soluzione di substrato chemiluminescente . Sviluppare e scansionare la piastra per l'intensità del colore .